小鼠elisa试剂盒双抗体夹心法：
：抗体包被 在96孔板上包被抗体。由于酶标板是由聚乙烯制成，其含有的环与抗体的酸残基具有类似π-π堆积作用的引力，结合静电和疏水作用，小鼠elisa试剂盒可以将抗体吸附于其表面。然后，将未吸附的抗体用缓冲液清洗后，加入含有明胶或牛血清蛋白（bovine serum albumin, bsa）的封闭液以封闭酶标板上未结合抗体的部分。加入封闭液的目的，是防止其他蛋白因静电或疏水作用吸附在96孔板上，造成假阳性信号，干扰后续实验的进行。
：免疫识别 在96孔板上包被抗体后，加入待测样，并在37°c环境下孵育一段时间，通常是1-2小时。此时酶标板上的抗体与待测抗原进行特识别结合。此处抗体的是关键，好的抗体既能特地结合抗原又不受待测样中其他生物大分子、蛋白质和无机盐等成分的影响。
：洗板 将未结合的抗原洗掉，加入该抗原所对应的识别抗体并在37°c下继续培养1-2小时，接着将未连接上抗原的抗体洗掉。
：酶标信号输出 加入带有辣根化酶（horseradish peroxidase, hrp）标记的酶标二抗，用于和标准抗体结合。在培养30分钟后洗掉未连接的二抗，并加入显色小鼠elisa试剂盒显色。根据显色的结果判断抗原的浓度。一般认为，抗原浓度与显色后的发光强度呈正相关。
小鼠elisa试剂盒免疫竞争法
以抗原竞争抗体为例，在上述免疫夹心法操作步骤的第二步加入待测抗原后，加入酶标抗原，使之与待测抗原竞争识别酶标板上的抗体。当待测抗原浓度越高，能够连上酶标板上抗体的酶标抗体就越少，输出的信号就越少。这样待测样浓度与酶显色信号就呈逆相关。